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        Folin-酚試劑盒
        folin-酚試劑法(lowry法)測蛋白質含量
        編號:FLF01 規格:50ml
        價格:70.00 數量:大量
        產地:鼎國

        Folin—酚試劑

        原理:Folin-酚法:(Lowry法)這種蛋白質測定法是最靈敏的方法之一。Folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基還原,產生深藍色(鉬蘭和鎢蘭的混合物)。在一定的條件下,藍色深度與蛋白的量成正比。  

         技術指標:本試劑盒可測定蛋白濃度0.05--1mg/ml。當蛋白濃度范圍在0.05-0.5mg/ml范圍時,線性關系最好。標準曲線相關系數:R2大于0.99.

            1.Folin—酚試劑甲

        溶液I: 2g無水碳酸鈉和20mg酒石酸鈉溶于100ml 0.2mol/l氫氧化鈉中(已配制成5X,用時稀釋5倍,使用完需另配)

        溶液Ⅱ: 0.5g五水硫酸銅溶于100ml水溶液。

        將稀釋后的溶液I與溶液Ⅱ,以50:1的比例混合,混合后即為Folin—酚試劑甲,此試劑只能用一天,過期失效。

        2.Folin—酚試劑乙

        原液濃度為2moL/L使用前需稀釋一倍,用多少稀釋多少。使其最后濃度為1moL/L。此為Folin—酚試劑乙應用液。Folin—酚試劑乙原液平時應密封貯存于4℃冰箱中避光保存。

        3.操作方法

        標準曲線的制作

        取14支試管分成兩組,按下表順序加入試劑,混勻,于室溫放置10分鐘。再加入0.5毫升試劑乙,立即搖勻,在室溫放置30分鐘,然后于500nm處比色。測定光密度值。取兩組測定的平均值,以蛋白質濃度為橫座標,光密度值為縱座標,繪制標準曲線為定量的依據。

        試劑/管號

        0

        1

        2

        3

        4

        5

        6

        BSA/ml(250ug/ml)

        0

        0.1

        0.2

        0.4

        0.6

        0.8

        1.0

        蒸餾水/ml

        1.0

        0.9

        0.8

        0.6

        0.4

        0.2

        0

        試劑甲/ml

        5

        5

        5

        5

        5

        5

        5

        試劑乙/ml

        0.5

        0.5

        0.5

        0.5

        0.5

        0.5

        0.5

        樣品測定:

        (1)取1毫升樣品溶液(約含20-250微克多肽或蛋白質)加入5毫升試劑甲混勻,于室溫放置10分鐘。

        (2)加入0.5毫升試劑乙(folin—酚),立即搖勻,于室溫保溫30分鐘;然后500nm(根據使用情況)處比色,以1毫升水代替樣品作空白對照。測定后,可以從標準曲線中查出未知樣品濃度。

        若用0.5厘米光程的比色杯進行比色,可按下面方法進行操作:取0.2毫升樣品溶液(約含5-100微克多肽或蛋白質),加入1毫升試劑甲(可選用0.3-0.5厘米直徑的小試管)混勻,10分鐘以后,再加入0.1毫升試劑乙,立即混勻,30分鐘后比色,一般來說,若多肽或蛋白質濃度在2-25微克,則采用波長755nm,而25微克以上則采用500nm比色為宜(波長選擇依使用情況)。

           
         

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        參考資料

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