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        RIPA裂解液
        RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP等。
        編號:WB-0071 規格:50ml
        價格:80.00 數量:大量
        產地:鼎國

         

        包裝清單:

        RIPA裂解液

        50ml(-20保存)

        PMSF100X

        550ul(-20保存)

        使用說明書

        1

         

        使用說明 

        1.培養細胞
             
        取出裂解液,待融化后顛倒混勻數次,適量分裝凍存。在使用前取出PMSF(100mM),按比例加入(使其最終濃度為1mM)混勻,立即使用。

         貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗2-3(如血清中的蛋白沒有干擾,也可以不洗)。按6孔板每孔加入100-200微升的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞數秒后細胞就會被裂解。

        懸浮細胞:收集培養細胞,離心去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗2-3(如血清中的蛋白沒有干擾,也可以不洗),用手指把細胞用力彈散,按6孔板每孔細胞加入100-200微升的比例加入裂解液。如果細胞數量較大,應按50-100萬細胞/管分裝或根據細胞數量按比例增加裂解液。用手指輕彈管底以促進裂解液和細胞充分接觸,裂解完全時應無明顯的細胞顆粒。

        裂解物經10,000-14,000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

         裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150微升或200微升。

         2.組織樣品 
             
        Ep管,分別稱重標記,把組織剪切成小塊裝入Ep管中,稱重。按每20毫克組織加100-200微升的比例加入裂解液(如裂解不完全,可以適當增加用量;如需要的蛋白樣品濃度較高,可以適當減少用量)。用手握式電動組織細胞勻漿器勻漿約1分鐘或直至充分裂解。10,000-14,000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

            如果組織樣品本身非常細小,如淋巴細胞,可直接加入裂解液,通過振蕩(Vortex)以使樣品裂解完全。

        保存條件:
             PMSF
        需-20保存,裂解液若經常使用,可于4保存至少三個月。若長期保存,建議置于-20

        注意事項 
         1
        .為獲得最佳的實驗效果,可適當分裝使用,以盡量避免反復凍融。 
         2
        PMSF應現用現加。 
         3
        .裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或4進行。 
         4
        .蛋白酶抑制劑均有較高的毒性,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。一旦直接接觸,請立即用流水沖洗,再向醫療保健結構咨詢。

           

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